亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法,其原理为:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。BSP(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。
DNA抽提→亚硫酸氢盐处理→引物设计及扩增→挑选克隆测序→数据分析
1. 组织、细胞:-80℃保存,干冰运输;
2. 血液:EDTA抗凝管,4℃运输;
3. DNA:体积≥50μl,浓度≥50 ng/μl,4℃运输。