服务介绍：

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一种以PCR反应为基础的DNA定量技术，通过对目标基因在扩增过程中产生的拷贝数进行实时的定量，从而达到对目的基因的定性和定量分析。现有两种常用的方法对PCR产物进行荧光定量：一种是利用荧光染料与双链DNA结合，通过荧光强度进行荧光定量；另一种是利用携带了荧光报告基因的特异性DNA探针对目标基因进行定量。
常用荧光染料有：SYBR GreenⅠ、EvaGreen、LC Green等
Taqman荧光探针作为定量检测的首选，是一种寡核苷酸，充当DNA复制的起点，荧光基团连接在探针的5'末端，淬灭剂连接在3'末端。PCR扩增时加入引物和探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，探针酶切降解，报告荧光基团与淬灭荧光基团分离，荧光信号被系统检测接收，每扩增一条DNA链伴随一个荧光分子形成，实时荧光信号的累积与PCR产物同步进行，实现实时定量的实验结果。相对于SYBR荧光染料具有序列特异性，直结合到互补区的强灵敏度。相较于杂交探针，其只需设计一条探针，既方便也能完成定量PCR要求。

实验结果展示：

引物设计实验流程：

获得游离5，-羟基→合成DNA原料→带帽（capping）反应→转化为稳定磷酸三酯→重复步骤4
探针引物设计实验流程：
目的基因查找比对→探针与引物设计→合成

荧光定量QPCR实验流程：
取材→RNA提取逆转录成cDNA→实时荧光定量PCR-(QPCR产物电泳)→数据分析

引物设计样品运输要求：

基因名称和种属、或已知探针引物序列、或基因ID号
荧光定量QPCR送样运输要求：
组织、细胞：-80℃保存，干冰运输；
血液：EDTA抗凝管，4℃运输；
RNA样本：体积≥10 μL，干冰运输。