过表达稳定细胞系是将靶DNA克隆到具有某种抗性或选择基因的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主基因组中,使外源基因在宿主细胞中长期稳定表达。
1. 引物设计与目的片段的扩增
2. 目的片段与慢病毒载体质粒连接,连接产物转化感受态细胞,挑取单克隆菌落,提取进行检测目标基因。
3. 慢病毒表达载体转染细胞,培养48小时后,收集细胞上清,测定病毒滴度。
4. 抗生素筛选稳定细胞株。
5. qPCR或WB检测目的基因的表达。
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