骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是存在于哺乳动物的骨髓基质中的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。
1. 将5-7日龄大乳鼠处死，剥离出双侧股骨及胫骨；
2. 骨两端剪口后，1ml无菌注射器吸取DMEM反复冲洗骨髓腔；
3. 收集细胞悬液，3ml完全培养基（含10%血清）重悬细胞，接种于6cm细胞培养皿中，培养箱内培养；
4. 16-24小时后倒置显微镜观察细胞贴壁情况，吸除培养基及未贴壁细胞，PBS冲洗，加入完全培养基培养细胞，培养箱内培养。
5. 三天内每日观察细胞生长情况并PBS冲洗、换液，后隔日换液。
6. 细胞融高于90%时，吸除培养基，PBS冲洗，加入胰蛋白酶溶液 1ml，37°C 消化贴壁细胞2-3min；
7. 显微镜下观察细胞皱缩变圆后，加入 1ml 完全培养基终止消化。
8. 加入完全培养基重悬细胞，并接种细胞于新的培养皿内，培养箱内培养。每日观察细胞生长情况，隔日换液。
9. 标记蛋白检测。
