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大鼠骨髓间充质干细胞原代培养

服务介绍:

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是存在于哺乳动物的骨髓基质中的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。

实验结果展示:



实验流程:

1. 将5-7日龄大乳鼠处死,剥离出双侧股骨及胫骨;

2. 骨两端剪口后,1ml无菌注射器吸取DMEM反复冲洗骨髓腔;

3. 收集细胞悬液,3ml完全培养基(含10%血清)重悬细胞,接种于6cm细胞培养皿中,培养箱内培养;

4. 16-24小时后倒置显微镜观察细胞贴壁情况,吸除培养基及未贴壁细胞,PBS冲洗,加入完全培养基培养细胞,培养箱内培养。

5. 三天内每日观察细胞生长情况并PBS冲洗、换液,后隔日换液。

6. 细胞融高于90%时,吸除培养基,PBS冲洗,加入胰蛋白酶溶液 1ml,37°C 消化贴壁细胞2-3min;

7. 显微镜下观察细胞皱缩变圆后,加入 1ml 完全培养基终止消化。

8. 加入完全培养基重悬细胞,并接种细胞于新的培养皿内,培养箱内培养。每日观察细胞生长情况,隔日换液。

9. 标记蛋白检测。


 

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