大鼠海马神经元细胞分离自海马体(Hippocampus),又名海马回、海马区、大脑海马,海马体主要负责记忆和学习。海马神经元细胞是海马区的主要细胞组成,主要功能是参与近期学习、情绪及内脏功能调节、是老年痴呆、癫痫等疾病的主要病灶之一。海马神经元细胞是研究神经细胞生物学特性和外源干扰因素作用的有效细胞模型。
1. 将培养瓶(板)用多聚赖氨酸包被;
2. 取新生24 h的SD大鼠断头处死,取出全脑;
3. 以脑中线为起点,小心拨开大脑颞叶皮层,暴露出新月状海马回,小心取出海马组织,剪碎组织;
4. 组织消化和计数;
5. DMEM/F12培养液重悬细胞,台盼蓝染色快速计数,调整细胞终浓度为105个/ml,接种于培养瓶;
6. 换液:接种后24 h将培养液换成无血清DMEM/F12培养液,第48 h时加入10 μmol/L的阿糖胞苷,以抑制非神经元细胞的过度生长,随后每3 d半量换液;
7. 最后就是标记蛋白检测。