小鼠主动脉内皮细胞(mice aortic endothelial cells,MAEC)分离自主动脉组织;主动脉是体循环动脉的主干。由左心室发出,起始部有主动脉瓣,可依次分为升主动脉,主动脉弓和降主动脉。降主动脉又分为胸主动脉和腹主动脉。接受左心室搏出的血液,并发出各级分支将血液运输到全身各组织、器官。当主动脉病变(如主动脉瘤、主动脉瓣狭窄、主动脉破裂等)时可影响全身血液的供应。
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。