服务介绍:
细胞凋亡期间基因组DNA被剪切后可能会形成低分子量的双链DNA片段或者高分子量的单链DNA片段,这些受损的DNA片段断端可通过酶反应修饰核苷酸末端3’-OH被识别。TUNEL反应可将凋亡与坏死及药物和辐射诱导的DNA链断裂区分开来。
实验结果展示:
实验过程:
- 经过固定及透膜后的细胞用微球菌核酸酶(micrococcal nuclease)或重组DNA酶(Dnaseirecombinant)在15-25℃条件下孵育10 min后再加入TUNEL反应液。
- TUNEL反应液孵育:样品中加入50 μl新鲜配置的TUNEL反应液后在37℃潮湿环境中避光孵育60 min,孵育完毕后吸干净TUNEL反应液弃之,加入PBS轻柔冲洗3次;
- 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色:加入配置好的DAPI染液于室温下孵育10 min吸出。PBS冲洗3次后,加入没过细胞的PBS保湿;
- 观察和分析:光学显微镜下观察。
样本运输要求:
石蜡切片常温、冰冻切片-20℃、固定后细胞爬片4℃