原位杂交的原理是含有互补序列（探针）的被标记的单链DNA或RNA片段在适当 的条件下与细胞的DNA或RNA杂交形成稳定的杂交体。无论是DNA(dsDNA、寡核苷酸和ssDNA)或是RNA(SSC RNA)探针均能用于定位DNA和mRNA，并且均能用于两个主要类型的标记策略：直接标记，即用报道分子（如同位素）附着于DNA或RNA；间接标记，在该法中将半抗原（如生物素或地高辛）附着于探针上，然后用标记的结合蛋白(如亲合素）检测或者用特异性的抗体检测靶探针杂交体
1. 组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12 h。
2. 脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。
3. 切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62℃烤箱烤片2 h。
4. 石蜡切片脱蜡至水
5. 消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15min，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37℃消化
6. 预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1 h。
7. 杂交：倾去预杂交液，滴加含探针杂交液, 恒温箱37°C杂交过夜。
8. 杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C洗10 min，1×SSC，37°C洗10 min，0.5×SSC室温洗10 min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。
9. DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8 min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。
10. 镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380 nm，发射波长420 nm,发蓝光；FAM(488)绿光激发波长465-495 nm，发射波长515-555 nm，发绿光；CY3红光激发波长510-560 nm，发射波长590 nm，发红光)DAPI染核，为蓝光。
1. 冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输；冰冻切片-20°运输。
2. 石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输；石蜡切片常温运输。
3. 细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15 min后，密封，4°C运输。共聚焦皿
4. 新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°C保存。
