激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)是近代生物医学图象仪器。它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。利用计算机进行图象处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象,以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。
涡状区LSCM图像
中央区LSCM图像
包埋→制片→拍照
以下所有样本必须尽量新鲜,固定液或悬浮液都不得冷冻结冰!
1. 电镜检测取材较为严格,取材需要迅速,材料块要小,固定液和材料比例为10:1。使用4%多聚甲醛加少量新鲜配制的戊二醛固定,使其终浓度为0.5%~1%。4℃保存或冰浴(条件允许,推荐)运输至我方。
2. 外秘体囊泡等用缓冲液(如PBS)或者试剂盒中的保存液悬浮,远距离-80℃冻存运输,近距离4℃保存运输,尽快制片及时电镜观察拍照。
注:将所取样本尽可能固定在生活状态下,并保存样本的抗原活性;免疫电镜由于GA浓度很低微细结构变化大,2h或过夜中间换液2~3次。